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【I814123】檢測車輪蟲的檢測套組及檢測車輪蟲的方法

書目
公告號 I814123 公開202319542
公告日 2023/09/01
公報卷期 50-25
證書號 I814123
申請號 110140834 E
申請日 2021/11/02
公報IPC C12Q 1/6876(2018.01); C12Q 1/6888(2018.01)
當前IPC C12Q 1/6876(2018.01); C12Q 1/6888(2018.01)
申請人 國立高雄科技大學 高雄市三民區建工路415號 (中華民國);
NATIONAL KAOHSIUNG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY NO. 415, JIANGONG RD., SANMIN DIST., KAOHSIUNG CITY, TAIWAN, R.O.C. (TW)
當前專利權人 國立高雄科技大學; NATIONAL KAOHSIUNG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
發明人 黃榮富 (中華民國); HUANG, JUNG-FU (TW);
黃清龍 (中華民國); HWONG, CHING-LONG (TW);
謝宇勛 (中華民國); XIE, YU-XUN (TW)
代理人 李世章; 秦建譜
審查委員 吳姵諄
摘要 本發明提供一種檢測車輪蟲的檢測套組，包含一引子組。引子組包含一如SEQ ID NO: 1所示之正向引子及一如SEQ ID NO: 2所示之反向引子。本發明另提供一種利用上述檢測套組檢測車輪蟲的方法。藉此，可快速、特異、方便且準確地確認檢測樣本是否受到車輪蟲感染。

參考文獻
引用非專利 期刊 Rokhmani et. al., “ Moleculer Detection of Protozoa Trichodina spp. In Gourami (Osphromenus Gourame Lac.) Larvae with The infecting 18S rRNA Gene Marking in Exs. Residence of Banyumas, Central Java” Biosaintifika, 10 (2), Universitas Negeri Semarang, 2018, p. 320-325;
期刊 Tang et. al., “Phylogenetic Analyses of Trichodinids (Ciliophora, Oligohymenophora) Inferred from 18S rRNA Gene Sequence Data” Curr Microbiol., vol. 66, Springer, 2013, p.306–313

專利範圍   原始格式 
專利範圍 1.一種檢測車輪蟲(Trichodina spp.)的檢測套組，包含：一引子組，包含：一如SEQ ID NO：1所示之正向引子；一如SEQ ID NO：2所示之反向引子；以及一螢光標記探針，包含如SEQ ID NO：3所示之一核苷酸序列；其中，該檢測車輪蟲的檢測套組是用以進行一即時聚合酶連鎖反應(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)而檢測一養殖水體中是否存有一車輪蟲核酸序列。

2.如請求項1所述之檢測車輪蟲的檢測套組，其中該螢光標記探針包含：一報告螢光基團，連接於如SEQ ID NO：3所示之該核苷酸序列的5’端；以及一遮蔽染劑，連接於如SEQ ID NO：3所示之該核苷酸序列的3’端。

3.如請求項1所述之檢測車輪蟲的檢測套組，更包含：一陽性對照組核酸樣本；以及一陰性對照組樣本。

4.如請求項1所述之檢測車輪蟲的檢測套組，更包含：一聚合酶連鎖反應試劑。

5.一種檢測車輪蟲的方法，包含：提供一檢測樣本作為模板，且該檢測樣本是位於該養殖水體中；將該檢測樣本以如請求項1所述之檢測車輪蟲的檢測套組進行該即時聚合酶連鎖反應；進行一螢光偵測步驟，其係偵測該即時聚合酶連鎖反應的一螢光強度變化數值；以及進行一分析步驟，其係比對該螢光強度變化數值與一預定螢光閾值，當該螢光強度變化數值大於該預定螢光閾值時，該檢測樣本將被判斷為包含該車輪蟲核酸序列。

6.如請求項5所述之檢測車輪蟲的方法，其中該檢測樣本為DNA或RNA。

7.如請求項6所述之檢測車輪蟲的方法，其中當該檢測樣本為RNA時，該檢測車輪蟲的方法更包含：進行一反轉錄步驟，其係對該檢測樣本進行一反轉錄反應。

8.如請求項5所述之檢測車輪蟲的方法，其中該螢光標記探針包含：一報告螢光基團，連接於如SEQ ID NO：3所示之該核苷酸序列的5’端；以及一遮蔽染劑，連接於如SEQ ID NO：3所示之該核苷酸序列的3’端。

9.如請求項5所述之檢測車輪蟲的方法，更包含：一陽性對照組核酸樣本；以及一陰性對照組樣本。
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